Nghiên cứu đột biến gen sửa chữa bắt cặp sai (MMR) liên quan đến ung thư đại trực tràng không polyp di truyền ở người Việt Nam - Nguyễn, Thị Hồng Vân (Đại học Quốc gia Hà Nội, 2015)
Tổng quan tài liệu và thu thập mẫu nghiên cứu: Tra cứu thông tin, thu thập các bài báo khoa học liên quan đến đề tài, viết phần tổng quan của tài liệu; Thu thập 50 mẫu máu, 50 mẫu mô bệnh phẩm từ các bệnh nhân được chuẩn đoán mắc ung thư đại trực tràng đến khám, điều trị tại Bệnh viện K, Bệnh viện Đại học Y Hà Nội và 10 mẫu đối chứng (người khỏe mạnh, tuổi trên 60). Nhân bản một số trình tự mã hóa của gen bằng PCR: Tách chiết ADN tổng số từ các mẫu máu và mô bệnh phẩm đã thu thập được; Thiết kế các cặp mồi đặc hiệu cho việc nhân bản một số phân đoạn gen MSH2; Tối ưu hóa và thực hiện phản ứng nhân bản một số exon thuộc gen MSH2 bằng PCR với những cặp mồi đặc hiệu. Phát hiện các đột biến ở gen nghiên cứu bằng các kỹ thuật sinh học phân tử: Phân tích PCR-SSCP; phân tích PCR-RFLP; Giải trình tự một số phân đoạn gen MSH2. Phân tích số liệu, viết báo cáo nghiệm thu. Kết quả khoa học: Đã thu thập được 50 mẫu bệnh phẩm (máu và mô bệnh phẩm) từ các bệnh nhân được chẩn đoán mắc ung thư đại trực tràng, dạ dày đến khám, điều trị tại Bệnh viện K, Bệnh viện Đại học Y Hà Nội và 10 mẫu đối chứng. Đã tách chiết thành công ADN tổng số từ các mẫu máu và mô bệnh phẩm thu thập được. Đã nhân bản được 09 exon gen MSH2 bằng kỹ thuật PDR (exon 2,3,6,7,8,12,13,14 và 15) bằng các cặp mồi đặc hiệu. Bằng kỹ thuật PCR-RFLP chúng tôi đã phát hiện được 1 đột biến ở exon 13 (mẫu T1) làm thay đổi vị trí cắt của enzyme Hae III. Sử dụng kỹ thuật PCR-SSCP trong phân tích đột biến trên các exon lựa chọn, chúng tôi đã phát hiện được 7 mô hình điện di sai khác ở 7 bệnh nhân. Trong đó , 1 mô hình thuộc exon 2, 1 mô hình thuộc exon 3, 3 mô hình thuộc exon và 2 mô hình thuộc exon 15. Đã phát hiện 4 đột biến gồm: 1 đột biến dịch khung (delA73331) trên gen MSH2 của mẫu mô T1, một đột biến mất nucleotide A tại vị trí 5193 (vùng intronnằm trước exon 2 gen MSH2); một đột biến thay thế nucleotide tại vị trí condon 199 nucleotide G bị thay thé bởi T (c.199 G>T) ở exon 3 dẫn tới thay đổi axit amin prolin (CCG)thành axt amin glutamin (CAG) trong chuỗi Polypeptide do gen MSH2 tạo ra và một đột biến thay thế C>A tại vị trí 77942 (tương ứng codon 848 trên exon 15) thuộc gen MSH2. Kết quả ứng dụng: 1 quy trình phân tích nhằm phát hiện đột biến gen sủa chữa bắt cặp sai có khả năng ứng dụng trong sàng lọc và chuẩn đoán ung thư đại trực tràng mang khuynh hướng duy truyền ở người Việt Nam.